Ahram-Biosystems

Step 1. 樣品製備

1. 取20 μL 血清 或 血漿 至 ASFV Direct Prep tube.
2. 在Palm PCR™S1 / S1e 進行兩階段的等溫反應
3. 於Ahram™ RX1 離心機 上離心 8500 RPM、2 min，之後取上清液 5 μL 到Palm PCR™ ASFV Fast PCR Kit

Step 2. Real- time PCR 診斷

1. 將Step 1. 樣品製備 所取得5μL的上清液加入Palm PCR™ ASFV Fast PCR Kit 試劑管，該試管中含有17μL的預混物，使樣品與預混物充分混合
2. 取出總體積22μL混合溶液，轉移到 Type IIA Palm PCR™ sample tube 蓋上光學蓋
3. 在RX1 離心機上以 8500 RPM 離心2分鐘，然後在Palm PCR™S1 / S1e 上執行 hot-start real-time PCR

靈敏度測試的豬瘟病毒樣品，URL-ASF reference sample (ASFV positive serum)取自歐盟 European Union Reference Laboratory for ASF (EURL-ASF), CISA-INIA, Spain。

實驗先以ASFV陰性血清連續稀釋URL-ASF參考樣品，然後用Palm PCR™ASFV Direct Prep Kit處理每個稀釋的血清樣品，再以Palm PCR™ASF Fast POCT Kit 混合樣品，然後在Palm PCR™S1 上執行 hot-start real-time PCR。

結果顯示ASFV DNA的比例為：1 / 10,000稀釋，偵測成功率為100％；1 / 100,000稀釋（約2.5拷貝/反應），偵測成功率為70％。用ASFV陰性血漿進行的系列稀釋也可得到相同的結果（數據未顯示）。